قصل دوم - سیستم های الایزا

فصل 2

 

 

سیستم های الایزا

این بخش واژه ها و پیکربندی بیشتر کاربردهای الایزا را تعریف کرده و بررسی میکند.چنین  بخشی مهم است چون فهم تواناییهای نهفته در سیستم های الایزا سبب میشود تا کاربرد آنها در طراحی سنجش بیشتر شود.همه سیستم های ناهمگون سه پارامتر پایه ای دارند.

1. یک واکنشگر، به فاز جامد که معمولا یک پلیت میکروتیتر با چاچوب 8*12 است میچسبد.
2.  ریاجنتها پی درپی به فاز جامدی که یک ماده به آن چسبیده است ا فزوده میشوند و با یک مرحله شستشوی ساده اجزای متصل و ازاد از هم جدا میشوند.
3. نتیجه به صورت تشکیل رنگ بدست میاید.

فصل اول - نگاهی به الایزا در رابطه با دیگر شاخه ها

فصل اول

 

نگاهی به الایزا در رابطه با دیگر شاخه ها

 

این فصل حوزه هایی از دانش را که برای کاربرد مناسب الایزا لازم است بررسی و ارتباط های آنها را ذکر میکند.این اطلاعات برای دانشجویان و آنانی که به دانشجویان آموزش میدهند کاربردی است .طرحها ی حاوی توضیحات اختصاری نکات کلیدی برای نمایش چنین ارتباط هایی استفاده شده است .آنچه که در این تجربه نهفته است ملاحظاتی است درمورد الزامات دقیقی که کاربران در استفاده از الایزا باید به آن توجه کنند.توجه به دانش فزاینده در حیطه هایی که برجسته شده است هم در امر طراحی تولید الایزا و هم در ارزش نهایی هر تستی که طراحی میشود ضروری است.

مقدمه ای بر الایزا

کتاب راهنمای الایزا

 

مقدمه

پیشرفتهای زیادی نبوده طوری که لازم به ویرایش وسیع در نسخه قبلی این کتاب لازم باشد.از این حقیقت ناشی میشود که سنجش های هتروژن مبتنی بر مولکولهای ایمنی متصل به انزیم (enzyme linked immunosorbent assay=ELISA) سیستم هایی بسیار عالی را در مطالعه طیف وسیعی از حوزه های بیولوژیکی فراهم میکند.

کروماتوگرافی (chromatography)-بخش اول

کروماتوگرافی و استخراج (chromatography and extraction)

 

مایع های زیستی مخلوط های پیچیده ای هستند و آزمایشهای بالینی برای اجزای خاصی از این مایع ها اغلب یک یا چند مرحله جداسازی پی در پی را می خواهد تا اجزای مورد نظر جدا یا تغلیظ شوند.روشهای معمول برای دست یافتن برای این جداسازی شامل 1) کروماتوگرافی (chromatography) 2) استخراج (extraction) 3) پرسیپیتاسیون افتراقی (differential precipitation) 4) الکتروفورز (electrophoresis) .این فصل مفاهیم پایه و اصول کروماتوگرافی و استخراج را که به عنوان تکنیکهای آنالیتیکال بکار میروند را توصیف میکند.

 

کروماتوگرافی (chromatography)

کروماتوگرافی فرایندی است که در آن اجزای یک مخلوط به وسیله توزیع افتراقی (differential distribution) میان فاز متحرک (mobile phase)  و فاز ثابت (stationary phase)، جدا میشوند.

الکتروفورز (electrophoresis) - بخش سوم

الکتروفورز (electrophoresis) - بخش سوم

 

 

میکروچیپ الکتروفورز (microchip electrophoresis)

طی یک دهه گذشته میکروچیپ الکتروفورز تحول های بنیادینی را به خود دیده است در 1) طراحی های میکروچیپ مجتمع  2) سیستم های آشکار ساز پیش رفته  3) کابردهای جدید. در حوزه تشخیص بالینی ،آنالیتهای عمده مورد جستجو در قالب میکروچیپ پروتیین ها و DNA هستند.

الکتروفورز (electrophoresis) - بخش دوم

الکتروفورز (electrophoresis) - بخش دوم

 

 

ایزوالکتریک فوکوسینگ الکتروفورز (isoelectric focusing electrophoresis)

ایزوالکتریک فوکوسینگ الکتروفورز ترکیبهای امفوتریک (amphoteric) مانند پروتیین ها را با توان جداسازی بالا در یک محیطی با شیب pH پایدار ، جدا میکند.

طیف سنجی نور (spectrophotometry) - بخش سوم

طیف سنجی نور (spectrophotometry) - بخش سوم

 

 

کالیبراسیون طول موج (wavelength calibration)

در دستگاه های با پهنای باند طیفی باریک ، یک شیشه ای از جنس هولمیوم اکساید (holmium oxide) در طیف 280 nm تا  650 nm اسکن میشود . این ماده قله های جذبی بسیار نوک تیزی در طول موجهایی معین از خود نشان میدهد و کاربر دستگاه میتواند طول موجهایی را که بیشترین جذب را تولید میکنند با مقدار های مشخص شده برای شیشه هولمیوم اکساید مقایسه کند.

طیف سنجی نور (spectrophotometry) - بخش دوم

طیف سنجی نور (spectrophotometry) - بخش دوم

 

منبع های نور (light sources)

انواع منبع های نور که در طیف سنج ها استفاده میشود شامل لامپهای گدازشی (incandescent lamps) ، لامپهای تخلیه زنون (xenon discharge lamps) ، دیودهای تابنده نور (light emitting diods) ، و لیزر ها (lasers) می باشد.

 

لامپهای گدازشی (incandescent) ، جرقه ای (Arc) و کاتدی (cathode)

در این نوع منبع های نور برای اندازه گیری در بخش نور مریی یک طیف ، معمولا از نور تنگستن (tungsten) استفاده میشود.طول عمر رشته تنگستن در حضور فشار کمی از بخارهای ید یا برم در درون لامپ افزایش می یابد( در حدود 2000 تا 5000 ساعت ).

منبع نور تنگستن انرژی تابشی کافی برای اندازه گیری در محدوده فرابنفش (کمتر از 320 nm ) را نمی تواند تامین کند.

طیف سنجی نور (spectrophotometry) - بخش اول

طیف سنجی نور (spectrophotometry) - بخش اول

 

اسپکتروفتومتری (spectrophotometry) 

فوتومتری به عنوان اندازه گیری نور تعریف میشود و اسپکتروفوتومتری به عنوان اندازه گیری شدت نور در طول موجهای انتخابی تعریف میشود.انالیزهای اسپکتروفوتومتری بصورتهای کمی و کیفی بطور وسیع در علوم زیستی و شیمیایی استفاده میشود ، این متد وابسته به ویژگی های جذب نوری ماده یا مشتقات ماده مورد انالیز دارد.شدت نور عبوری که از یک محلول حاوی یک ماده جذب کننده نور ( رنگزا = chromogen) عبور میکند با کم شدن بخش جذب شده ، کاهش می یابد. این کسر در شدت نور ، تشخیص داده شده ، اندازه گیری شده و برای ارتباط دادن نور عبوری یا جذب شده با غلظت انالیت مورد نظر ارتباط داده میشود .

ماهیت نور (nature of light)

مقدمه 

بسیاری از اندازه گیری ها که در ازمایشگاه های بالینی انجام میشود بر مبنای اندازه گیری انرژی تابیده شده ، انرژی عبور کرده ، انرژی جذب شده ، انرژی پراکنده شده یا منعکس شده تحت شرایط کنترل شده صورت میگیرد. در این فصل به اصول چنین اندازه گیری هایی می پردازیم.

 

ماهیت نور 

تابش های الکترومغناطیس شامل انرژی های تابش شده است که طول موچ آنها از 10 nm  در مورد امواج کیهانی شروع میشود و به 1000 km برای امواج رادیویی میرسد. با این حال ما در این فصل وقتی در مورد واژه نور صحبت میکنیم شامل انرژی های تابیده شده در گستره فرابنفش تا نور مرئی(180 – 800 nm) است.